納米探針在制備用于標(biāo)記DNA，RNA和其他核酸的金標(biāo)記試劑方面具有持續(xù)的研究興趣。Monoamino Nanogold，Monomaleimido Nanogold和Mono-sulfo-NHS-Nanogold®®®都可用于標(biāo)記核苷酸。對納米金®試劑的特定反應(yīng)性必須首先摻入所需標(biāo)記位點(diǎn)的核苷酸中。這可以通過三種方式實(shí)現(xiàn)：

5'-用單氨基納米金®標(biāo)記（適用于所有寡核苷酸）:

首先，酶促去磷酸化5'末端。使用CDI（N，N'-羰基二咪唑）或EDC（1-乙基-3，3'-二甲氨基丙基碳化二亞胺）與磺基-NHS或咪唑?qū)埩舻牧姿峄D(zhuǎn)化為反應(yīng)性酯。將活化酯與單氨基納米金®反應(yīng);它將通過酰胺鍵偶聯(lián)，如 方案 1:

5'末端的硫醇化和單馬來酰亞胺基納米金®標(biāo)記（適用于所有寡核苷酸）:

如上所述，用 CDI 或 EDC 去磷酸化和激活。如 Chu（參考文獻(xiàn) 1）所述，與 2,2'-二硫雙（乙胺）二鹽suan鹽（胱胺二鹽suan鹽）反應(yīng)，或者用咪唑、胱胺和 EDC（參考文獻(xiàn) 2）處理 5'-磷酸化核苷酸。用 0.1 M DTT 還原并與過量的 DTT 嚴(yán)格分離以生成游離硫醇，如 Ghosh 所述（參考文獻(xiàn) 2）。如方案 2所示，用 Monomaleimido Nanogold® 標(biāo)記生成的硫醇化寡核苷酸：

通過取代亞磷酰胺引入的反應(yīng)性基團(tuán)標(biāo)記（用于合成寡核苷酸）:

使用市售的改性亞磷酰胺試劑在特定堿上引入受保護(hù)的胺或受保護(hù)的硫醇（這些試劑可從以下位置獲得 克隆泰克 或 格倫研究).然后根據(jù)替代亞磷酰胺的推薦方案脫保護(hù)，并用單馬來酰亞胺納米金或單磺基-NHS-納米金®®標(biāo)記。

如果這些方法不適用于您的系統(tǒng)，您可以使用 帶正電荷的納米金®.該試劑用多種胺官能化，在中性或酸性pH下帶正電荷。然后，它將靜電結(jié)合到寡核苷酸帶負(fù)電荷的磷酸基團(tuán)。

或者，通過核苷酸的生物素化或在合成過程中摻入生物素修飾的亞磷酰胺，將半抗原（如生物素）引入寡核苷酸探針中。然后使用 納米金®抗生物素（IgG或Fab'）或鏈霉親和素.我們希望一旦其中一個抗體供應(yīng)商開始以更實(shí)惠的價(jià)格攜帶未標(biāo)記抗體，就立即推出金標(biāo)記的抗digoxigenin。