LUCS 13 是一種可滲透細(xì)胞的核酸染料，在與核酸結(jié)合后呈現(xiàn)綠色熒光。該染料具有高熒光產(chǎn)量，且結(jié)構(gòu)與 SYTO™13 染料相同。

LUCS 13 用于對(duì)活的和死的真核細(xì)胞以及革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細(xì)菌中的 DNA 和 RNA 進(jìn)行染色。染料被 488 nm 的藍(lán)色激光激發(fā)。其熒光發(fā)射在熒光素通道中檢測(cè)到，與 DNA 結(jié)合時(shí)峰值為 509 nm，與 RNA 結(jié)合時(shí)峰值為 514 nm。

該染料可用于同時(shí)標(biāo)記細(xì)胞不可滲透的核標(biāo)記物（例如 YoDi-3），以使用熒光顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)評(píng)估細(xì)胞活力。

協(xié)議

確切的方案取決于具體的細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)任務(wù)。一般來說，可以描述如下：

1. 準(zhǔn)備 50 µM LUCS 13 儲(chǔ)備溶液。為此，將 990 µl 去離子水添加到 10 µl 5 mM LUCS 13 溶液中。儲(chǔ)備液可以等分并冷凍以供長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

2. 要制備 1 µM LUCS 13 工作溶液，請(qǐng)將 20 µl 50 µM LUCS13 庫存添加到 980 µl PBS 中。

3. 以合適的方式小心地從生長(zhǎng)表面去除貼壁細(xì)胞。對(duì)于懸浮細(xì)胞，從下一點(diǎn)開始工作。

4. 用冷 PBS（pH 7.4）清洗細(xì)胞一次。 300 g離心 5 分鐘獲得種子細(xì)胞 。

5. 將細(xì)胞在 1 ml 1 μM LUCS 13 工作溶液中于 37°C 孵育 30 分鐘。

6. 300 g離心 5 分鐘去除染料溶液 。

7. 用 PBS 清洗細(xì)胞一次。

8. （可選）如有必要，可以將細(xì)胞在含 3.7% 甲醛的 PBS 中固定 15 分鐘，用 PBS 洗滌，然后用另一種染色劑重新染色。

重要的

• 處理 LUCS 13 溶液時(shí)請(qǐng)使用塑料瓶，因?yàn)橄♂尩娜玖峡赡軙?huì)粘在玻璃上。

• 使用無磷酸鹽緩沖液（例如鹽水中的 15 mM HEPES）可獲得更明亮的染色結(jié)果。

• 在開始實(shí)驗(yàn)之前，測(cè)試幾種染料濃度范圍從 10 nM 到 5 µM，以確定最佳的染料稀釋度。染色結(jié)果受許多因素影響：生長(zhǎng)培養(yǎng)基、細(xì)胞密度、其他細(xì)胞類型的存在、染色持續(xù)時(shí)間等。